小鼠白細胞介素-6樣品收集方法

一、血清：用無菌管收集，室溫血液自然凝固10-20分鐘，2-8℃條件離心20分鐘左右 （2000-3000轉/分）仔細收集上清，保存過程中 如出現沉淀，應再次離心。

二、血漿：應根據標本的要求選擇EDTA、肝素鈉或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成應該再次離心。

三、尿液：用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

四、組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液，稱重后將剪碎的組織與 對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9 mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適 當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，在冰上充分研磨。為了進一步 裂解組織細胞，可以對勻漿液進行反復凍融或超聲破碎。最后將勻漿液于2-8℃，5000×g 離心5-10分鐘取 上清檢測。

五、細胞提取液：貼壁 細胞用冷的PBS輕輕清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g離心5分鐘后收集細胞。懸浮細胞可直接離心收集。收集的細胞用冷的PBS洗滌3次。每106個細胞中加入150-200 μL PBS重懸(推薦在PBS 中加入蛋白酶抑制劑；若含量很低可減少PBS的體積)并通過反復凍融或超聲使細胞破碎。將提取液于2-8℃，1500×g離心10分鐘，取上清檢測。

六、細胞培養上清或其他生物體液；收集液體后于2-8℃，1000×g離心20分鐘，除去雜質及細胞碎片，取上清檢測。

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2023.9.6