用途：
快速 Western Blot 的封閉液，可用于 高效快速的封閉轉(zhuǎn)膜后的 NC 或 PVDF 膜
產(chǎn)品介紹：
5min 快速封閉液（10×）是一款無蛋白成分快速 Western Blot 的封閉液，可用于 高效快速的封閉轉(zhuǎn)膜后的 NC 或 PVDF 膜，可替代脫脂奶粉、BSA 等傳統(tǒng)封閉液。 整個封閉過程僅需 5 分鐘，封閉效果可等同或者優(yōu)于脫脂奶粉、BSA 等傳統(tǒng)封閉液， 幫助用戶獲得 WB 更好的信號目的條帶與更低的背景結(jié)果。該試劑為無蛋白成分封閉液，可 很好的避免內(nèi)部成分與抗體發(fā)生交叉反應(yīng)，適用性更加廣泛，普遍適用于常規(guī)抗體與磷酸化 的抗體的 WB 檢測。
產(chǎn)品特點：
1.超快免洗封閉——5min 完成封閉，無需洗滌，直接孵育一抗；
2. 無蛋白成分——很好的避免因封閉液成分中的蛋白與抗體非特異性結(jié)合導(dǎo)致的非特異性 條帶出現(xiàn)或者高背景；
3. 通用于常規(guī)抗體，磷酸化抗體，生物素標記抗體；
4. 抗原抗體結(jié)合增強配方——可有效增加抗原抗體結(jié)合能力，更好的目的條帶信號，更低 背景。
操作步驟：
1. 將 快速封閉液（10×）：去離子水按照 1:9 稀釋成 1×快速封閉液工作液；
2. 將轉(zhuǎn)膜完成后的 NC 或者 PVDF 膜放入適宜體積的 1x快速封閉液中（注意需完全覆 蓋膜，對于 6.5*8.5cm 的整膜，推薦使用量 15-20ml），置于水平搖床上，室溫條件下振 蕩孵育 5 分鐘。
3. 千萬注意：使用的一抗抗體母液必須用 1× 快速封閉液稀釋成對應(yīng)的抗體工作液（后 續(xù)抗體工作液可直接在 4 度回收保存至少 2 個月），可更好的保證后續(xù)實驗結(jié)果的低背景， 二抗可正常按照常規(guī)實驗方式稀釋即可。
備注：本步驟也可用 穩(wěn)定型抗體稀釋來代替快速封閉液 稀釋一抗后孵育，曝光效果更佳，還可顯著增加一抗工作液回收次數(shù)與保存時間，稀釋后 的抗體工作液 4 度長期保存時間可延長至 6-12 個月。
4. 取出封閉完成的膜，注意無需 TBST 洗滌，直接放入步驟 2 配置的一抗工作液正常孵育， 完成后 TBST 重復(fù)洗滌 3 次，每次 10min。
5. 將步驟 3 中的孵育好一抗的膜加入步驟 2 配置的二抗工作液中孵育，孵育完成后 TBST 重 復(fù)洗滌 3 次，每次 10min，后續(xù)正常曝光。
注意事項：
1. 該封閉液也可能存在一些不適用的實驗體系，因此對于一些特殊的實驗或抗體效果不能 達到預(yù)期的，可以考慮用更適宜的封閉體系來進行實驗；
2. 信號弱或者無信號：
（1）目的蛋白樣品上樣量過少或者抗體濃度過低，可加大上樣量或者增加一抗工作抗體濃 度；
（2）轉(zhuǎn)膜效率過低導(dǎo)致膜上無目的蛋白或者目的蛋白過少，重新轉(zhuǎn)膜后用麗春紅染色檢驗 轉(zhuǎn)膜效果正常后再進行后續(xù)封閉與一抗二抗孵育；
（3）抗體效價低，特異性差等原因造成，需要根據(jù)實驗情況進行調(diào)整。
3. 背景高：
（1）未用 快速封閉液稀釋一抗； 解決方案：用 1x快速封閉液稀釋一抗或 穩(wěn)定型抗體稀釋（貨號：NST0114）來 稀釋一抗即可。
(2）抗體使用量過多或者蛋白上樣量過大會導(dǎo)致大量的非特異性條帶出現(xiàn)；
解決方案：降低蛋白上樣量或者抗體濃度即可避免。
(3）轉(zhuǎn)印膜的洗滌時間次數(shù)過少或者時間過短；
解決方案：補充 TBST 洗滌次數(shù)與洗滌膜的時間。
（4）試劑或儀器設(shè)備被污染等原因造成.
解決方案：需要根據(jù)實驗具體情況進行調(diào)整。
友情提醒：實驗時請穿戴實驗服并佩戴一次性手套操作。
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